【作者】張亞軍 金慶日 邵春艷 桂海孌 方維煥 楊夢(mèng)華 宋厚輝
【機(jī)構(gòu)】浙江農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院
摘要：桔青毒素(citrinin,CTN)是以玉米、谷物、奶酪等為主要成分的食品和動(dòng)物飼料中常見(jiàn)的、由桔青霉菌產(chǎn)生的酮類(lèi)真菌毒素,可引起人和動(dòng)物的慢性中毒或癌癥,一直缺少靈敏的快速檢測(cè)方法。本文通過(guò)指數(shù)富集適體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(簡(jiǎn)稱(chēng)SELEX)對(duì)可能與CTN結(jié)合的特異性適體進(jìn)行了篩選,經(jīng)過(guò)15輪循環(huán),得到17條適體。通過(guò)二級(jí)結(jié)構(gòu)分析、親和力檢測(cè)發(fā)現(xiàn)適體13(Apt-13)對(duì)CTN有較好的親和度,解離常數(shù)Kd為0.06μmol/L。進(jìn)一步利用非熒光標(biāo)記染料Pico Green,利用其與雙鏈DNA結(jié)合的原理,建立了桔青毒素非標(biāo)記熒光檢測(cè)方法,30min完成檢測(cè),最低檢測(cè)限達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(50ppb)且與其他毒素?zé)o交叉反應(yīng)。本研究建立的基于適體的桔青毒素檢測(cè)技術(shù)成本低,可以替代傳統(tǒng)的基于抗體的檢測(cè)方法,為霉菌毒素的精準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)的開(kāi)發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
基金：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)(2012AA101602)； 浙江省科學(xué)技術(shù)廳重大科技專(zhuān)項(xiàng)重大農(nóng)業(yè)項(xiàng)目(2014C02003)； 浙江農(nóng)林大學(xué)人才項(xiàng)目(2011FR025； 2012FR047； 2013FR012； 2013FR054)~~；
關(guān)鍵詞：桔青毒素; 指數(shù)富集適體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù); 適體; 親和度;
【機(jī)構(gòu)】浙江農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院
摘要：桔青毒素(citrinin,CTN)是以玉米、谷物、奶酪等為主要成分的食品和動(dòng)物飼料中常見(jiàn)的、由桔青霉菌產(chǎn)生的酮類(lèi)真菌毒素,可引起人和動(dòng)物的慢性中毒或癌癥,一直缺少靈敏的快速檢測(cè)方法。本文通過(guò)指數(shù)富集適體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(簡(jiǎn)稱(chēng)SELEX)對(duì)可能與CTN結(jié)合的特異性適體進(jìn)行了篩選,經(jīng)過(guò)15輪循環(huán),得到17條適體。通過(guò)二級(jí)結(jié)構(gòu)分析、親和力檢測(cè)發(fā)現(xiàn)適體13(Apt-13)對(duì)CTN有較好的親和度,解離常數(shù)Kd為0.06μmol/L。進(jìn)一步利用非熒光標(biāo)記染料Pico Green,利用其與雙鏈DNA結(jié)合的原理,建立了桔青毒素非標(biāo)記熒光檢測(cè)方法,30min完成檢測(cè),最低檢測(cè)限達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(50ppb)且與其他毒素?zé)o交叉反應(yīng)。本研究建立的基于適體的桔青毒素檢測(cè)技術(shù)成本低,可以替代傳統(tǒng)的基于抗體的檢測(cè)方法,為霉菌毒素的精準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)的開(kāi)發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
基金：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)(2012AA101602)； 浙江省科學(xué)技術(shù)廳重大科技專(zhuān)項(xiàng)重大農(nóng)業(yè)項(xiàng)目(2014C02003)； 浙江農(nóng)林大學(xué)人才項(xiàng)目(2011FR025； 2012FR047； 2013FR012； 2013FR054)~~；
關(guān)鍵詞：桔青毒素; 指數(shù)富集適體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù); 適體; 親和度;