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    SEFA-PCR法克隆靈芝鯊烯合酶基因啟動子及其序列分析


    【發(fā)布日期】:2018-06-19  【來源】:菌物學報
    【作者】李娜 王世明 陳軍 李玉祥 趙明文
    【機構(gòu)】南京農(nóng)業(yè)大學生命科學學院農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)環(huán)境微生物工程重點開放實驗室南京農(nóng)業(yè)大學生命科學學院農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)環(huán)境微生物工程重點開放實驗室 南京210095
    【摘要】鯊烯合酶是靈芝三萜生物合成的關(guān)鍵酶,靈芝鯊烯合酶基因的表達和活性的高低決定了靈芝中三萜含量的高低。根據(jù)已經(jīng)獲得的靈芝鯊烯合酶全長cDNA序列設(shè)計一對專一引物,通過PCR擴增得到了靈芝鯊烯合酶基因的基因組全長,序列長1984bp,含有3個內(nèi)含子。根據(jù)其基因組序列設(shè)計引物,采用SEFA-PCR的方法,以總DNA為模板,克隆了靈芝鯊烯合酶基因的啟動子序列,長1042bp。序列分析發(fā)現(xiàn)靈芝鯊烯合酶基因啟動子中沒有明顯的TATA和CAAT框,但是含有CCAAT-bindingfactor、GATA-1、GC-box、TFⅡD等重要的轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點,以及在人和釀酒酵母鯊烯合酶基因啟動子中發(fā)現(xiàn)的甾醇調(diào)節(jié)相關(guān)的順式調(diào)控元件。 
    【基金】國家自然科學基金(30300006,30571294); 江蘇省自然科學基金創(chuàng)新人才項目(BK2006517)資助;
    【關(guān)鍵詞】靈芝三萜; 生物合成; 轉(zhuǎn)錄調(diào)控;
     
     
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