【作者】郝帥 郭建強(qiáng) 李運(yùn)敏 岳麗麗 矯慶華

【機(jī)構(gòu)】中國(guó)科學(xué)院微生物研究所三元基因有限公司VA Medical Centre 111C5 Department of Medicine University of Californiaat San Francico 4150 Clement StreetSan FranciscoCA 94121USA北京100080中國(guó)科學(xué)院研究生院北京100049北京100083

【摘要】利用畢赤酵母的質(zhì)粒載體pPIC9K將極端耐熱古菌Pyrococcusfuriosus的超耐熱酸性α-淀粉酶(Amy)基因轉(zhuǎn)化到多型漢遜酵母HP-6中,獲得重組漢遜酵母。經(jīng)過(guò)甲醇進(jìn)行誘導(dǎo),表達(dá)產(chǎn)物的酶活性檢測(cè)和SDS-PAGE電泳,證明α-淀粉酶(Amy)在多型漢遜酵母中利用AOX1啟動(dòng)子和α-因子信號(hào)肽有效表達(dá)并分泌到胞外。該酶的最適反應(yīng)溫度為90～100℃,最適作用pH為4.0～5.0,較之重組畢赤酵母的最適作用pH還低0.5。此外與畢赤酵母的重組蛋白相比,重組漢遜酵母α-淀粉酶不僅菌株篩選簡(jiǎn)便、周期短,而且具有更容易篩選到高拷貝轉(zhuǎn)化子以及適用于大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵等優(yōu)點(diǎn)。 

【基金】國(guó)家科技攻關(guān)計(jì)劃(2001BA708B03-03)；

【關(guān)鍵詞】Pyrococcusfuriosus; AOX1啟動(dòng)子; MOX啟動(dòng)子; α-因子信號(hào)肽;