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    依賴于DNA的RNA聚合酶與體外轉錄的研究 Ⅰ.酵母變異株20B-12 RNA聚合酶A和C的純化及鑒定


    【發(fā)布日期】:2017-12-18  【來源】:菌物學報
    【作者】張渝英;劉年娟;楊開宇;
    【機構】中國科學院微生物研究所;中國科學院微生物研究所;北京;
    【摘要】從酵母變異株20B-12經(jīng)過超聲波處理、硫酸銨沉淀、DEAE纖維素和磷酸纖維素層析等步驟,純化依賴于DNA的RNA聚合酶A和C,得到聚丙烯酰胺凝膠電泳均一的條帶。其中不含DNase、RNase 和蛋白酶活力,無內源DNA。測定了 RNA 聚合酶A和C對α-鵝膏葷堿的敏感性。酶A在α-鵝膏葷堿為400μg/ml時,活性受到抑制,而酶C在該濃度時,幾乎不受抑制。(NH4)2SO4對酶A的最適濃度為20mM,對酶C有二個最適濃度,分別為40mM和240mM。無二價金屬離子Mn2+或Mg2+,酶A和C幾乎無活力。兩種酶最適Mn2+濃度均為2.5mM,Mg2+濃度均為5mM。兩種酶以熱變性小牛胸腺DNA為模板,測活性均較天然小牛胸腺DNA為模板時高。 
    【關鍵詞】依賴于DNA的RNA聚合酶;釀酒酵母變異株20B-12;RNA 聚合酶的純化;
     
     
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