銀耳芽孢內源gpd啟動子的克隆與功能鑒定
Isolation and Functional Analysis of a Gpd-Tf Promoter from Yeast-like Conidia of Tremella fuciformis

【作者】 聶燕華； 林俊芳； 王杰； 尤琳烽； 郭麗瓊；

【Author】 NIE Yanhua1,2,LIN Junfang1,3,WANG Jie1,3,YOU Linfeng1,3,GUO Liqiong1,31College of Food Sciences,South China Agricultural University,Guangzhou,Guangdong 510640,China;2Department of Tropical Crops,Guangdong AIB Polytechnic University,Guangzhou,Guangdong 510507,China; 3Institute of Biomass Research,South China Agricultural University,Guangzhou,Guangdong 510640,China

【機構】 華南農業(yè)大學食品學院生物工程系； 廣東農工商職業(yè)技術學院熱作系； 華南農業(yè)大學生物質能研究所；

【摘要】 利用反向長距離PCR技術從銀耳(Tremellafuciformis)芽孢gpd基因出發(fā)克隆上游gpd啟動子序列,將預測的gpd啟動子片段與多功能纖維素基因(mfc)連接構建表達載體,與潮霉素抗性質粒pBgGl-hph共轉化銀耳芽孢,對擬共轉化子進行酶活發(fā)酵試驗。結果表明:4輪反向長距離PCR克隆得到了1761bp的上游序列,經預測啟動子落在上游1000bp左右區(qū)域內,包含兩個高分值的起始轉錄位點,將gpd啟動子分成gpd-Tre1(885bp)、gpd-Tre2(708bp)、gpd-Tre3(466bp)3段區(qū)域,分別與多功能纖維素基因(mfc)構建表達載體pgTre1-mfc、pgTre2-mfc和pgTre3-mfc。擬共轉化子酶活發(fā)酵試驗結果發(fā)現3個表達載體的轉化子均能檢測到多功能纖維素酶活,轉化子T1-2包含gpd-Tre1啟動子大片段,整體酶活最高,CMC酶活為14.12U/mL,比出發(fā)菌株Tr01提高34.3%,比工程菌株yLes3提高25.7%,木聚糖酶活為34.8U/mL,比Tr01酶活提高26.3%,略低于yLes3。3個啟動子片段均具有表達活性,相比之下885b...

【Abstract】 A 1761 bp upper flanking sequence of the gpd promoter was isolated from yeast-like conidia of Tremella fuciformis by a four-step amplification using long distance inverse PCR(LD-IPCR).After sequence analysis,expression vectors were constructed with the gpd promoter and a multi-function cellulase gene(mfc),and co-transformed into the yeast-like conidia with the hygromycin resistance plasmid pBgGl-hph.This sequence contained the gpd promoter,which was located in the upper 1000 bp,together with two...

【關鍵詞】 銀耳； 芽孢； gpd啟動子； 反向長距離PCR； 多功能纖維素酶；
【Key words】 Tremella fuciformis； yeast-like conidia； gpd promoter； long distance inverse PCR； multi-functional cellulase；

【基金】 國家高技術研究發(fā)展計劃(編號:2006AA10Z301);國家自然科學基金(編號:30371000,30671457)的部分研究內容

【分類號】S567.34