誤食野生蘑菇中毒事件近年來在我國頻頻發(fā)生，已成為我國食物中毒事件中導致死亡的最主要因素，并且80%以上的蘑菇中毒死亡都是由劇毒的鵝膏菌所引起。中毒后蘑菇種類的早期鑒定對于中毒診斷和治療具有非常重要的作用，然而，由于鵝膏菌物種的多樣性以及往往中毒現(xiàn)場樣本的不完整性，形態(tài)鑒定又需要專業(yè)分類工作者，同時，目前的分子生物學鑒定需要PCR儀和DNA測序，所需時間長，難以滿足基層疾控和醫(yī)療單位對毒蘑菇中毒后需要快速鑒定毒源的要求。

　　湖南師范大學生命科學學院真菌研究室陳作紅教授課題組利用兩種恒溫擴增技術(shù)——環(huán)介導等溫擴增技術(shù)（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）和超分支滾環(huán)擴增技術(shù)（hyperbranched rolling circle amplification，HRCA），基于α-鵝膏毒肽基因（α-AMA）序列和核糖體DNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）序列設(shè)計了一系列引物和探針，建立了一系列針對劇毒鵝膏菌的快速分子檢測方法?？梢院芎玫蔫b定和區(qū)分親緣關(guān)系非常近的劇毒鵝膏各物種，以及準確識別和區(qū)分劇毒鵝膏和非劇毒鵝膏。同時，這些方法相比傳統(tǒng)的PCR法，具有更高的特異性和靈敏性，簡單快速，成本低，僅需要一個恒溫水浴鍋，1-2小時內(nèi)就能完成檢測反應(yīng)，通過染料顏色變化即能判斷反應(yīng)結(jié)果。這些方法非常適合于基層單位推廣和現(xiàn)場應(yīng)用，對于蘑菇中毒物種的快速鑒定和中毒患者的診斷、治療具有非常重要的意義。

　　2019年6月17日和18日，研究成果“Universal Identification of Lethal Amanitas by Using Hyperbranched Rolling Circle Amplification based on α-amanitin Gene Sequences”和“Development and evaluation of Isothermal Amplification Methods for Rapid Detection of Lethal Amanita Species”分別發(fā)表在Food Chemistry（1區(qū)，IF=5.399）和Frontiers in Microbiology期刊上（2區(qū)，IF=4.259），兩篇論文的第一作者均為何正蜜博士生，通訊作者為陳作紅教授。該研究得到了國家自然科學基金、湖南省生態(tài)學重點學科的支持。
      陳作紅教授表示：“這篇文章的創(chuàng)新就在于以近年來新發(fā)現(xiàn)的鵝膏毒素基因為靶點設(shè)計了特異性鎖式探針，基于鵝膏毒素基因來區(qū)分劇毒鵝膏和非劇毒鵝膏。原來希望能通用性識別所有含鵝膏毒肽的物種，但是發(fā)現(xiàn)只能鑒定鵝膏菌，不能識別含鵝膏毒肽的其它屬的物種，文章也分析了原因。該文得到了2個審稿專家的很好評價。”

9種劇毒鵝膏菌子實體形態(tài)圖

劇毒鵝膏菌恒溫擴增檢測流程

基于α-鵝膏毒肽毒素基因超分支滾環(huán)擴增技術(shù)檢測劇毒鵝膏結(jié)果

劇毒鵝膏菌LAMP通用性檢測結(jié)果　　

      文章鏈接1

　　https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0308814619311331

　　文章鏈接2

　　https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2019.01523/abstract