靈芝多糖鍺的抗腫瘤及免疫增強(qiáng)作用研究

中國(guó)生化藥物雜志 2000年第4期第21卷 論　著

作者：牛建偉　謝平

單位：牛建偉（河南省醫(yī)藥工業(yè)研究所　開封，475003）；謝平（開封醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校）

　　關(guān)鍵詞: 靈芝多糖鍺， 腫瘤抑制率， 巨噬細(xì)胞活性

　　摘　要　目的：研究靈芝多糖鍺對(duì)實(shí)驗(yàn)性肉瘤和腹腔巨噬細(xì)胞活性的影響。方法：利用接種肉瘤S180腹水型誘導(dǎo)的小鼠腫瘤模型，檢測(cè)對(duì)S180肉瘤的抑制率；利用酸性磷酸酶測(cè)定法，檢測(cè)對(duì)荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的影響。結(jié)果：靈芝多糖鍺可抑制小鼠S180肉瘤的生長(zhǎng)，能增強(qiáng)荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的活性。結(jié)論：靈芝多糖鍺具有抗腫瘤及免疫增強(qiáng)活性。

　　中圖分類號(hào)　Q93-33

Study on Effects of Saccharum Germanium of Glossy Ganoderma on Immunity and Antitumor

Niu Jianwei　Xie Ping

　?。℉enan Institute of Pharmaceutical Industry　Kaifeng 475003）

　　Abstract　Purpose：To study the effects of saccharum germanium of glossy ganoderma on experimental sarcoma and on the activity of rhagiocrine cells in abdomial cavity.Methods:By vaccinating ascites inducing mouse′s tumor model of sarcoma,the rate of inhibition of saccharum germanium of glossy ganoderma on the sarcoma was tested.By using the determination of acid phosphatase, the effects of the activity of rhagiocrine cell in the abdominal cavity of the mouse that caught tumor were tested.Results:The compound of saccharum germanium of glossy ganoderma may inhibit the mouse′s sarcoma from growing and increase the activity of rhagiocrine cells in the abdominal cavity of rhagiocrine cells in the abdominal cavity of the mouse that caught tumor.Conclusion:Saccharum germanicim of glossy ganoderma can resist tumour and increase the immunological activity.

　　Key words　Saccharum germanium of glossy ganoderma, Inhibition rate of tumour, Rhagiocrine cell

　　靈芝多糖鍺是利用生物工程技術(shù)，將無機(jī)鍺(GeO2)加入到靈芝菌深層發(fā)酵培養(yǎng)液中，通過菌絲體內(nèi)物質(zhì)代謝轉(zhuǎn)化，將Ge元素結(jié)合于大分子多糖上，成為多糖絡(luò)合物，經(jīng)測(cè)定其鍺與多糖的結(jié)合率達(dá)90%以上。本文報(bào)告靈芝多糖鍺對(duì)小鼠S180肉瘤的抑制作用和對(duì)荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的影響。

　　1　材料和方法

　　1.1　材料

　　靈芝多糖鍺、靈芝多糖，發(fā)酵液濃縮2倍，河南省醫(yī)藥工業(yè)研究所微生物研究室；二氧化鍺溶液，濃度為10%，上海建材學(xué)院鍺研究室。

　　健康昆明小鼠、純系NIH小鼠，雄性，體重18～22 g，河南省醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

　　小鼠肉瘤S180腹水型，河南省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所腫瘤藥理研究室。

　　RPMI 1640,Gibco公司；結(jié)晶酚、苯基磷酸二鈉，均為AR級(jí)，北京化工廠；小牛血清，深圳生化制品廠。

　　1.2　方法

　　1.2.1　腫瘤接種　無菌條件下，抽取荷瘤小鼠腹水，顯微鏡下計(jì)數(shù)瘤細(xì)胞，用生理鹽水調(diào)至1×107個(gè)瘤細(xì)胞/ml，混勻后，每鼠右側(cè)腋部皮下注射0.2ml。

　　1.2.2　對(duì)小鼠S180肉瘤的抑制作用　昆明種小鼠接種瘤細(xì)胞后，隨機(jī)分為生理鹽水組、靈芝多糖鍺組、靈芝多糖組和GeO2組，每組10只。24 h后灌胃給予相應(yīng)的藥物，每12 h一次，0.5 ml/次，連續(xù)給藥10 d，末次給藥24 h后頸椎脫臼法處死動(dòng)物，取出實(shí)體瘤組織并稱重，計(jì)算腫瘤抑制率。兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。

　　1.2.3　對(duì)荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的影響　純系NIH小鼠接種瘤細(xì)胞后，按1.2.2項(xiàng)分組、給藥，每組12只，連續(xù)給藥8 d。停藥24 h后，每只小鼠腹腔注射RPMI 1640 3～4 ml，注射3次，每次注射后輕揉腹部2～3 min，吸取腹腔液2～3 ml注入同一試管中，混勻，1 500 r/min離心10 min，棄去上清，沉淀加入含15%滅活小牛血清的RPMI 1640，混勻后計(jì)數(shù)，最后調(diào)整細(xì)胞數(shù)至4×106個(gè)/ml。將同組內(nèi)3只小鼠的腹腔細(xì)胞作等量混合，加至24孔培養(yǎng)板中，37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)靜置30 min，去除非粘附細(xì)胞，去離子水沖洗3次，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞貼壁情況，反復(fù)凍融6次，使細(xì)胞膜破裂將酸性磷酸酶釋放出來。采用酸性磷酸酶測(cè)定法［2］測(cè)定巨噬細(xì)胞活性。兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。

　　2　結(jié)　果

　　2.1　靈芝多糖鍺對(duì)小鼠S180肉瘤的抑制作用

　　由表1結(jié)果可見，靈芝多糖鍺對(duì)S180肉瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)具有抑制作用，抑制率33.3%，其平均瘤重與對(duì)照組比較具有顯著差異(P＜0.01)；靈芝多糖平均瘤重也比對(duì)照組輕(P＜0.01)；GeO2雖然也有抑制腫瘤生長(zhǎng)的趨勢(shì)，但與對(duì)照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。

表1　靈芝多糖鍺對(duì)小鼠S180肉瘤的抑制作用(n=10,±s)

組　別 瘤重(g) 抑制率(%)

生理鹽水 1.34±0.16

靈芝多糖鍺 0.89±0.281 33.30

靈芝多糖 0.98±0.191，3 27.08

GeO2 1.21±0.162，3 10.34

　　與生理鹽水比較：1P＜0.01，2P＞0.05；與靈芝多糖鍺比較：

　　3 P＞0.052.2　靈芝多糖鍺對(duì)S180肉瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的影響

　　結(jié)果見表2。由表2可見，靈芝多糖鍺可明顯升高S180肉瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的活性，與對(duì)照組比較具有顯著性差異(P＜0.01)；而靈芝多糖、GeO2對(duì)荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的影響不明顯(P＞0.05)，并且二者與靈芝多糖鍺比較，有顯著性差異(P＜0.01)。

表2　靈芝多糖鍺對(duì)荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的影響(n=12,±s)

組　別 巨噬細(xì)胞活性(U/100ml)

生理鹽水 0.25±0.05

靈芝多糖鍺 0.36±0.051

靈芝多糖 0.27±0.052，3

GeO2 0.29±0.042，3

　　與生理鹽水比較：1P＜0.01，2P＞0.05；與靈芝多糖鍺比較：

　　3 P＜0.013　討　論

　　本文對(duì)采用生物工程技術(shù)，通過深層發(fā)酵培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的靈芝多糖鍺進(jìn)行了抗腫瘤及作用機(jī)制的研究。結(jié)果提示，靈芝多糖鍺對(duì)小鼠S180肉瘤具有抑制作用，且抑制作用比靈芝多糖、GeO2強(qiáng)，說明在靈芝菌深層發(fā)酵培養(yǎng)過程中強(qiáng)化鍺，使其通過菌絲體內(nèi)生物代謝轉(zhuǎn)化為有機(jī)態(tài)的真菌多糖鍺，可使藥效提高。

　　本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，靈芝多糖鍺作用下的S180肉瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的活性明顯增強(qiáng)，由于靈芝多糖鍺與靈芝多糖、GeO2兩組間差異顯著，并且后二者與生理鹽水對(duì)照無差異，推測(cè)靈芝多糖鍺能使荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性增強(qiáng)的成分不是靈芝多糖和GeO2，而是生物轉(zhuǎn)化來的有機(jī)態(tài)的靈芝多糖鍺。并且靈芝多糖鍺是通過活化巨噬細(xì)胞活性而起到抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用的，提示靈芝多糖鍺是一種有潛在抗腫瘤作用的物質(zhì)，這也為真菌藥物的開發(fā)和藥效活性的提高提供了一條可供參考的新途徑。

參考文獻(xiàn)

　　1，徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).北京∶人民衛(wèi)生出版社，1982∶1115～1144

　　2，林飛卿，匡彥德，秦慧蓮，等.小鼠巨噬細(xì)胞激活狀態(tài)的測(cè)定――三種測(cè)定法的比較.中華微生物和免疫學(xué)雜志，1981，1(4)∶274～278